如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线(包括基因和载体的连接、转化和鉴定)和关键点.
如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线(包括基因和载体的连接、转化和鉴定)和关键点.
其他人气:340 ℃时间:2020-02-03 08:34:52
优质解答
已经得到扩增的目的基因片段和克隆载体→对两者分别进行酶切(选要相同的限制性内切酶对两者进行切割)→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行连接(一般选用T4连接酶)→大肠杆菌感受态细胞的制备(常见的有氯化钙法)→转化(将重组载体导入感受态细胞中)→将上一步得到的大肠杆菌进行涂板,倒置培养18-20个小时→筛选和快速鉴定(直接挑取单克隆菌落,进行菌落PCR,电泳检测PCR产物,挑取阳性克隆的菌落)
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